植物外泌体质谱

    制造用于诊疗用途的外泌体——尽管有几项正在进行的临床试验涉及外泌体，但到目前为止，还没有外泌体疗法进入市场。部分原因可能在于大规模制造外泌体的生产和纯化工艺不足，而且大多数当前文献的大部分重点是开发新的外泌体并通过体外和动物研究证明它们的潜力，很少强调或理解转化外泌体疗法所需的条件。外泌体可以设计为携带诊疗分子，如蛋白质或RNA，许多研究正在进行以优化其诊疗潜力，方法是增加外泌体的产生和从生产细胞释放，提高货物装载效率，增加组织趋向性，并增加货物释放到目标细胞。外泌体的生物发生由几种ESCRT蛋白和参与囊泡形成和出芽的蛋白协调，因此，沉默或促进这些蛋白的表达可能会增加生产细胞释放的外泌体的数量。这可能与提高生产细胞生产外泌体的效率和降低诊疗性外泌体的制造成本有关。研究人员开发了针对CHMP4C、VPS4B、ALIX和VTA1的shRNA，这四种ESCRT基因参与了外泌体生物发生。有趣的是，VPS4B和CHMP4C-shRNA、LIX和VTA1shRNA的组合使释放的外泌体数量增加了50%以上。 外泌体表面具有特定的蛋白标志物，其内含物也极为丰富。植物外泌体质谱

    将蛋白质包装到外泌体中虽然EXOtic系统允许将编码蛋白质的mRNA包装到外泌体中，但其他人已经开发出一种将未结合的诊疗性蛋白质加载到外泌体中的方法。CRY2是一种植物蛋白，在暴露于蓝光时会改变构象，而CIBN是CIB1的截短版本，CIB1是一种对处于激发态的CRY2具有亲和力的蛋白质。CIB1附着在外泌体标记CD9的胞质尾部，而CRY2附着在报告蛋白，例如mCherry和GFP。当生产细胞暴露在蓝光下时，这个名为EXPLOR的系统被证明可以通过与CIB1的可逆结合将cargo-CRY2加载到外泌体中。基于这个模型，Osteikoetxea等人测试了CRISPR相关核酸内切酶9(Cas9)蛋白是否可以加载到外泌体中，并将其与其他三种基于暴露于激huo刺激物后的异二聚化的类似加载系统进行比较。研究证明，装载CRY2-CIB1导致外泌体级分中的Cas9浓度比较高，达到每个外泌体超过20个Cas9分子。这项研究的一个值得注意的观察是数据表明，用于蛋白质货物输送的MysPalm工程似乎与工程化四跨膜蛋白标记（如CD9）相比更具优势。这种观察的两个可能原因是：1)结合结构域在与膜蛋白结合时可能无法在ER中正确折叠或2)它可能干扰CD9定位到外泌体膜中的天然位点。支持这一观点的观察结果表明，连在一起的Cas9活性only为WTCas9的30-50%。 细胞外泌体western blot外泌体工程实验表明外泌体中的DNA和miRNA参与调节适应免疫和先天免疫反应。

    外泌体是tumour发生和转移的关键介质，但S100A10的细胞外功能，尤其是与外泌体(EV-S100A10)相关的细胞外功能尚不清楚。在体外和体内研究了S100A10和EV-S100A10在HCC进展中的功能和机制。针对S100A10的中和抗体(NA)用于评估EV-S100A10的显着性。在功能上，S100A10在体外和体内促进HCC的起始、自我更新、化学抗性和转移。重要的是，我们发现HCC细胞在体外和HCC患者的血浆中都将S100A10分泌到外泌体中。富含S100A10的EV可增强HCC细胞的干性和转移能力，上调表皮生长因子受体(EGFR)、AKT和ERK信号，并促进上皮-间质转化。EV-S100A10还在HCC细胞运动中充当趋化剂。重要的是，S100A10控制EV中的蛋白质货物，并通过与整合素α的物理结合介导MMP2、纤连蛋白和EGF与EV膜的结合。重要的是，用S100A10-NA阻断EV-S100A10会显着消除这些增强作用。总而言之，我们的结果表明，S100A10通过其在EV中的转移和调节EV的蛋白质货物显着促进HCC进展。EV-S100A10可能是HCC进展的潜在诊治靶点和生物标志物。

    研究认为，在外泌体中可以发现少量的DNA，这种DNA可以对检测血清外泌体中CA相关突变有价值，外泌体中特定的miRNA或miRNA组可能在CA的检测中提供诊断或预后潜力。外泌体中的致ai和抑aimiRNA可能具有较高的诊断价值，因为它们在ai细胞和正常细胞之间的差异表达，可能增强它们在早期诊断中的有用性，致aiKras被报道在外泌体中差异富集miR-100，循环中外泌体miR-21升高与胶质母细胞瘤和胰腺ai、结直肠ai、结肠ai、肝ai、乳腺ai、卵巢ai和食管ai相关，尿源性外泌体miR-21升高与膀胱ai和前列腺ai相关。其他与多种CA类型相关的外泌体致aimicroRNA包括miR-155、miR-17-92簇和miR-1246。在脑、胰腺、结直肠、结肠、肝脏、乳腺、前列腺和食管ai；口腔鳞状细胞ai；以及淋巴瘤和白血病中观察到上调。tumour抑制miRNA，包括miR-146a和miR-34a，与肝脏、乳腺、结肠、胰腺和血液恶性tumour相关。 外泌体可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化等方方面面。

    外泌体在心肌梗死后的诊治中的成功应用取决于对其在心脏信号传导和调节中的作用的更好理解。在这里，我们报道了心肌梗死(MI)后循环的外泌体携带LncRNATUG1，它通过抑制HIF-1α/VEGF-α轴来下调血管生成，并且这种作用可以通过远程缺血调节(RIC)来抵消。通过左冠状动脉结扎（MI模型）和再灌注（缺血/再灌注I/R模型）诱发MI的大鼠被随机分为RIC、MI(I/R)或假手术(SO)对照。还利用了一项队列研究和一项针对MI患者的随机对照试验的数据，前者涉及未接受经皮冠状动脉介入诊治(PCI)的患者，后者涉及接受PCI的患者。外泌体浓度在大鼠（MI和I/R模型）以及人类（有和没有PCI）的干预组（RIC与对照组）之间没有差异。然而，MI和I/R外泌体减弱了HIF-1α、VEGF-α和内皮功能。LncRNATUG1在MI和I/R外泌体中增加，但在SO和RIC外泌体中减少。HIF-1α表达随MI和I/R外泌体而下调，但随RIC外泌体而增加。外泌体抑制通过RIC外泌体抑制HIF-1α上调。VEGF-α被鉴定为HIF-1α调节的靶基因。HIF-1α的敲低降低了VEGF-α、内皮细胞管形成。HIF-1α的过度表达产生相反的效果。用外泌体抑制剂GW4869和HIF-1α抑制剂si-HIF-1α转染和共转染293T细胞证实了外泌体-LncRNATUG1/HIF-1α/VEGF-α通路。 外泌体circ_0006602作为肝ai的早期诊断和筛查标志物，诊断的灵敏度和特异度均高于常见的血清中流标志物。吉林外泌体lncRNA芯片

外泌体及其携带的组分参与肝脏细胞的增殖、再生和迁移等生理过程，在肝脏疾病和肝损伤中起着重要作用。植物外泌体质谱

    微小RNA(miRNA)和细胞外囊泡中包含的其他成分可能反映疾病的存在。特发性肺纤维化(IPF)患者的肺组织、痰液和血清显示出miRNA表达的改变。我们设计这项研究是为了测试来自IPF个体的尿液和/或组织来源的外泌体miRNA是否携带可促进纤维化的物质。从尿液(U-IPFexo)、肺组织肌成纤维细胞(MF-IPFexo)、患有IPF的个体(n=16)和年龄/性别匹配的无肺病对照(n=10)的血清中分离外泌体。我们分析了分离的外泌体的microRNA表达及其体内生物分布。我们研究了对离体皮肤伤口愈合和体内小鼠肺模型的影响。U-IPFexo或MF-IPFexo表达miR-let-7d、miR-29a-5p、miR-181b-3p和miR-199a-3p，这与之前关于从IPF患者的肺组织/血清中获得的miRNA表达的报道一致。体内生物分布实验在静脉输注后5分钟内检测到正常C57Bl6小鼠肺部的生物发光外泌体，随后分布到其他organ，无论外泌体来源如何。在肺泡上皮I型和II型细胞中观察到用金纳米粒子标记并通过透射电子显微镜成像的外泌体。用U-IPFexo或MF-IPFexo处理非纤维化肺获得的人和小鼠肺穿孔产生纤维化表型。在人体离体皮肤模型和体内肺模型中也诱导了纤维化表型。我们的结果提供了IPF系统特征的证据，即从纤维化来源获得的外泌体含有促纤维化miRNA。 植物外泌体质谱

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